(一)淋巴因子转基因表达
淋巴因子在传染病治疗中具有十分重要的作用和广泛的应用前景。其中的干扰素(ifn)已成为目前抗肝炎病毒治疗唯一公认有效的基因工程药物。利用淋巴基因表达进行传染病的基因治疗研究,是基因治疗在传染病中的一个重要应用和重要的研究方向。
1、干扰素的基因转移与表达
seif等将小鼠的干扰素β(ifnβ)的基因置于主要组织相容性复合体(mhc)的启动子序列的控制之下,构建重组表达载体,转染babl/c小鼠的成纤维细胞系nih3t3,得到了持续的ifnβ的表达。表达ifnβ的细胞系,对滤泡口炎病毒(vsv,vesicularstomatitisvirus),脑心肌炎病毒(emcv,encephalomy-ocarditisvirus)和塞姆利基森林病毒(semlikiforestvirus)的复制和表达均有明显的抑制作用。并发现持续低水平的ifnβ的分泌表达,就可以使这一细胞系产生明显的抗病毒状态。然而,用等量的外源重组的ifnβ则无此效果。而且,加入相应的ifnβ的单克隆抗体并不能阻断这种转导的细胞系对上述三种病毒的抑制效应。因此认为,此细胞系的抗病毒状态的产生,除了和分泌型ifnβ的表达有关以外,还有可能存在其它的作用方式。另外,bednarik等将人的α2干扰素(ifnα2)的基因重组到人免疫缺陷病毒(hiv)的长未端重复序列(ltr)中的启动子下游,转入非洲绿肾细胞系中,ifnα2的分泌表达水平持续在50~150u/ml之间。这一低水平的ifnα2的表达完全可以抑制hiv的复制和转录。同样地也发现就用相应水平的外源重组的ifnα2也无此效果。而且ifnα2的单抗也不能阻断ifnα2的抗病毒作用。这一差别的原因,作者认为体内产生的ifnα2与体外重组的ifnα2的抗病毒机理不同。外源重组的ifnα2的抗病毒机理,是抑制hiv的成熟和装配过程,而内源表达的ifnα2的抗病毒作用,似乎是主要作用在转录水平以及hivmrna的稳定性等方面。
2、白细胞介素-2的转基因表达
guidotti等应用hbvdna转基因小鼠,证实il-2对hbvdna转录的2.1kb的mrna具有明显的抑制作用。认为il-2对hbvdna转录2.1kbmrna的启动子活性有明显的负调控作用。同时,还通过肿瘤坏死因子(tnf)和γ干扰素(ifnγ)的诱生达到抗病毒的效果。因为肝细胞膜上没有il-2的受体,所以认为il-2的抗病毒作用是其对hbvdna启动子活性的直接抑制使用来实现的。并且认为il-2抑制hbvdna的表达是在转录后水平上发生的。
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