(一)检验方法
1.样品采集
以无菌方法采取具代表性的样品,置灭菌的容器内。一般采集患者粪便、呕吐物和中毒的可疑原因食品。常见可疑的食品有鱼、虾、蟹、贝等海产品及其他有关的食品。若上述食品均为煮熟品,也可检验它们的包装物、烹调用具等。
副溶血弧菌不宜在低温环境中生存,故采集到的样品应尽快送往实验室,不宜冷冻保存运送,以免影响检验结果。
2.分离培养
副溶血弧菌营养要求不高,普通培养基、蛋白胨水中均可生长。在含盐3.5%的培养基上生长良好,0.5%盐时可生长,12%以上及无盐的培养基中不能生长。发育温度为30-37~c,以37~c最佳。生长的ph范围是7.0-9.5,最适ph为7.7~8.0,需氧性强,厌氧生长很缓慢。多数菌株于肉汤、蛋白胨水等培养基中呈浑浊表面形成菌膜。r型菌发生沉淀。厌氧培养48h以上,才见生长。固体培养基上菌落常呈圆形隆起,不透明,表面光滑、湿润,多数菌株继代后,呈不正圆。粗糙型菌落,灰白半透明或不透明,在emb琼脂上不生长。某些菌株在麦康凯培养基上不生长。生长者,其菌落为圆形、平坦、半透明或浑浊略带红色。从腹泻病例初次分离到的菌落多较典型一般不形成色素。食品中分离到的菌株,多为r型。胆酸盐稍有阻止该菌扩散的作用,血平板上可见溶血环。在氯化钠蔗糖平板上菌落呈绿色。s.s琼脂上菌落中等大,无色透明、扁平、有动性,不易被接种环挑起。该菌对乙酸,90%以上菌株对0/129抑制弧2,4-二氨基-6,7-二异丙基喋啶)敏感。该菌的溶血作用是因其具有耐热性溶血素,这种溶血素是相对分子质量约为42000的酸性蛋白质,对心脏有毒性,是一种即时型致死毒。
(二)动物试验
经上述试验符合副溶血性弧菌的菌株接种于3.5%nacl蛋白胨水中,经16-18h培养后,小鼠腹腔注射0.3ml,观察2-3天。小鼠症状为竖毛,不活泼,食欲不振,腹部贴饲养罐底,呼吸困难,步态蹒跚有时呈痉挛性跳动、四肢抽搐及尾部痉挛性振动,多于24-48h内死亡,将死亡小鼠作剖检与分离培养。
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