当检测的样品不是血清,而是宫颈黏液和子宫、卵管分泌液时,由于样品取材量少,难得,采用微量测定法可以弥补以上的不足。而且所得结果与半定量精子制动试验无异,所以作者的实验室即是测定血清中的抗体,亦采用微量精子制动方法。
【准备】
(1)准备微型反应板一块。
(2)将液状石蜡置32℃预温。
(3)精子悬浮液及补体的制备与半定量精子制动试验相同。
(4)子宫、卵管内分泌液经高速离心,除去有形成分,再进行56℃30min灭活处理。
(5)宫颈黏液提取液的制备:于排卵前,从子宫颈管取透明的宫颈黏液,放入尖底塑料小离心管内,称取黏液重量,按宫颈黏液1mg加入灭活未婚女性血清1μl的比例加入血清,充分搅拌后,放置4℃30min,用9700×g,30min离心分离,吸取上清作为宫颈黏液提取液,把宫颈黏液的可溶性成分估计在内,提取液的浓度作为原血清的2倍稀释。再经56℃30min灭活处理后供实验用。
【方法】
(1)取微型反应板,用预温的液状石蜡充满。
(2)用微量移液器,分别把提取液10μl,精子悬浮液(40×106/ml)1μl,补体血清2μl注入由液状石蜡封面的微型反应板孔内。
(3)对照设两组:①补体对照:不加补体或以灭活补体血清代替;②检体对照:用灭活处女血清代替;③用振荡法混合后,置32℃孵育1h、2h、3h;④取出后,用倒置显微镜(200×)计算实验组和对照组的精子运动率(t%,c%)。
【判断】
当c%与t%之比在50%以下时,即精子制动值siv=c/t≥2时,判为阳性。
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