精子凝集试验从最初由kibrik等(1952年)创立的白明胶内精子凝集试验开始连同其后的发展,一共有4种:①明胶凝集试验(kibrik,1952);②试管玻片凝集试验(franklin,dukes,1964);③毛细管凝集试验(shulman,hekman,pann,1971);④浅盘凝集试验(friberg,1974)。
(一)明胶凝集试验(gelatinagglutinationtest,gat)
【准备】
(1)配制baker液(bakersolution)
葡萄糖3、00gna2hpo4·7h2o0.46g
nacl0.20gkh2po40.01g
加双蒸水至100ml。
(2)用baker液配制10%白明胶溶液,并置37℃水浴中备用。
(3)精子悬浮液:取正常新鲜精液(精子密度为80×106/ml左右,活动率>60%,a、b两级活动精子>70%),室温液化,用baker液稀释至40×106/ml,置37℃水浴中保存备用。
(4)待检血清及对照血清处理,均经56℃水浴加热30min,以灭活补体。随后用baker液,将两种血清均作1∶4~1∶32倍数稀释,存放于37℃水浴中备用。
【方法】
(1)取一定量的精子悬浮液,加入等量的10%明胶溶液,充分混合后,取0.3ml分别加入装有0.3ml对倍稀释血清的各支小试管内,并使其充分混合。
(2)将混合液分别用毛细吸管移置另一小试管(3mm×30mm)内,37℃孵育2h,移置4℃放置5min,待明胶凝固后,观察明胶内精子凝集情况,并判断结果。
【判断】
(1)阴性:精子在明胶内均匀分散,若以黑纸作背面对光观察,呈均匀乳白色,不见凝集块。
(2)阳性:精子成小凝集块,对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状,不难鉴别。
(3)抗体效价:以阳性反应的最高血清稀释倍数为血清凝集抗体效价。;
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