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5大检查让尖锐湿疣现形

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(三)扩增产物的检测和分析

1.凝胶电泳扩增反应结束后,取出反应管,冷却至室温,取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的dna带。

2.核酸杂交如果凝胶电泳无清楚的dna或需确定dna带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作southern吸印杂交、斑点杂交验证。

按照标准方法制32patp标记的寡核苷酸探针,需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×。106-5×。106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h,随后于30-55℃下用洗涤液(2×。ssc、0.1%sds)迅速冲洗杂交膜,除去多余探针。

然后进行洗膜,其条件依所用探针而异公用混合探针,55℃洗膜10min。my12、my13及my16探针,56-57℃下10min,并换液重洗1次。my14及wd74探针,58-59℃下10min,亦换液重洗1次。

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