化学检查方法用化学试验来找细菌（如亚硝酸试验和白细胞酯酶试验）仅适用于筛查的目的，但排出的新鲜尿如果亚硝酸试验阳性，高度提示尿路感染。
尿液培养尿液应尽快培养。如果预计要耽搁10~20分钟以上，则应置于4℃冰箱保存。尿最好接种在血琼脂平板上，在37℃孵育24~48小时。应用定量取菌环在血琼脂平板上划线。如果尿取自于耻骨上穿刺或膀胱插管，应该分别用0。001ml和0。1ml进行培养。尿袋收集的或清洁排出的尿标本用0。001ml进行培养。细菌学工作人员，应选择血琼脂平板，尽管试剂盒方法（例如玻片法或滤纸法）是敏感的。有时确实存在着尿路感染，但菌落计数很低，这可能与已用抗生素治疗，尿液极度稀释（比重＜1。003），或者重度感染导致尿流梗阻的缘故。重复培养能提高其准确度。
上泌尿道与下泌尿道感染的鉴别试验上泌尿道与下泌尿道感染的鉴别有时很困难。如果小儿有高热，肾区叩痛，大量脓尿伴有管型，那么肾盂肾炎的诊断可以确定。然而更敏感的诊断技术（如膀胱冲洗，浓缩能力检查测定有抗体包被的细菌）已经用于临床研究。许多无症状或仅有膀胱炎症状的小儿被证实是上泌尿道感染。在临床上一般没有条件进行这些专门检查。
